ララゾチドペプチド

固相ペプチド合成では、最初のステップは、固相キャリアとして適切な樹脂を選択することです。一般的に使用される樹脂には、王樹脂、リンクアミド樹脂などが含まれます。これらは異なるリンク基と化学的安定性を持ち、標的ペプチドの特性に従って選択できます。樹脂を原子炉に入れ、腫れのために適切な量のジクロロメタン（DCM）またはN、N-ジメチルホルムアミド（DMF）を追加し、ピリジンやヘキサヒドロピリジンなどの試薬を使用して、樹脂の樹木群で硬膜群を露出させます。

Amino酸を保護基（FMOC Gly OH、FMOC Val OHなど）にDMFに溶解し、カップリング試薬（HBTU、HATU、DICなど）および活性化因子（HOBTなど）を追加し、活性化レジンを含む反応器に追加します。適切な温度（通常は室温）および攪拌条件下で、アミノ酸は樹脂でアミノ基と凝縮反応を起こし、ペプチド結合を形成します。結合反応が完了した後、樹脂をDMFで洗浄して、反応のないアミノ酸と試薬を除去します。

ピリジンまたはヘキサヒドロピリジンを使用して、新しく結合したアミノ酸のFMOCまたはBOC保護基を除去し、次のアミノ酸を結合させます。グリシン、バリン、ロイシン、バリン、グルタミン、プロリン、グリシンなどのアミノ酸を連続的に接続して、ララゾチドペプチド鎖全体の合成が完了するまで、樹脂に順番に接続し、上記の結合と脱保護のステップを繰り返します。

すべてのアミノ酸が結合さ​​れた後、反応器から樹脂を除去し、切断試薬（トリフルオロ酢酸、フェノール、水、トリイソプロピルシランなどの混合溶液など）で室温で反応を攪拌して、樹脂からペプチド連鎖を切断し、アミノ酸側鎖の保護基を除去します。切断反応が完了したら、樹脂をろ過して除去し、ろ液を収集します。ろ液を氷のエーテルで沈殿させ、粗ペプチドを得るために遠心分離しました。粗ペプチドは、高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）によって精製され、不純物と副産物を除去し、高純度ララゾチドを除去しました。

適切な保護戦略を選択し、ララゾチド鎖をいくつかの短い断片に分割します。これは液相で個別に合成されます。たとえば、ジペプチドやトリペプチドなどの小さな断片を最初に合成できます。合成プロセス中、保護基を持つアミノ酸は、カップリング試薬と活性化因子の作用により、ターゲットフラグメントを形成する作用下で、適切な溶媒（DMF、DCMなど）で徐々に結合されます。各フラグメントが合成された後、純度と正しい構造を確保するために精製および特徴づけられる必要があります。

液相で合成された断片を共役して、完全なララゾチド鎖を得ます。フラグメントカップリングでは、通常、活性化されたエステル法や混合無水法などのメソッドを使用します。たとえば、1つの断片のカルボキシル基を活性化されたエステルに変換し、別のフラグメントのアミノ基と反応してペプチド結合を形成します。結合反応が完了した後、製品を精製し、特徴づけて特徴づけられて、未反応の断片と副産物を除去する必要があります。

多数の樹脂ビーズをいくつかの等しい部分に分け、各樹脂ビーズに異なるアミノ酸またはフラグメントを取り付けます。次に、これらの樹脂ビーズを混ぜて、次の結合反応に進みます。セグメンテーション、合成、および混合の複数のプロセスを通じて、短期間で多数のララゾチド類似体を合成できます。

合成後、特定の生物学的活性を持つララゾチド類似体のペプチドライブラリーをスクリーニングします。スクリーニング方法では、生物活性アッセイやハイスループットスクリーニングなどの技術を使用できます。スクリーニングされた活性化合物の構造的識別とさらなる研究は、ララゾチドの構造的最適化と医薬品開発の基礎を提供します。