サスタノン CAS 58-22-0

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サスタノン、テストステロン、テストステロン、テストステロンとしても知られ、分子式はC19H28O2であり、白色の結晶性粉末であり、エタノール、エーテルおよび有機溶媒に可溶ですが、水には不溶です。ステロイドホルモンの一種で、男性の精巣や女性の卵巣から分泌されます。副腎も少量のテストステロンを分泌します。筋肉の強度と質の維持、骨密度と強度の維持、リフレッシュと体力の向上の機能があります。

テストステロンは、もともとマウス精巣セルトリ細胞の濃縮培地から同定された分泌糖タンパク質です。これは分子量が小さい細胞骨格関連タンパク質であり、受容体関連タンパク質を介して細胞表面にしっかりと結合できます。

の使用サスタノン:

医療用途: 睾丸炎、男性更年期障害、インポテンスおよびその他の疾患の代替治療に使用されます。

スポーツ用途：筋肉の数を増やします。筋肉量を増やすために運動する人の中には、治療用量の250倍の用量を使用する人もいます。

その他の用途: 生化学研究。天然のアンドロゲンは、男性の性器および男性のパラセクシュアルの兆候の発達と成長を制御します。

リスク: ニキビ、浮腫。

テストステロン合成サスタノン:

レポートⅠ

ステップ1: アンドロステンジオン30gを10倍重量の混合溶媒(ジクロロメタン:テトラヒドロフラン=1∶1)に溶解し、- 15度まで冷却します。

ステップ 2: 3g の水素化ホウ素カリウムを 30ml の蒸留水または純水に溶解します。

ステップ３：第２ステップで得られた水素化ホウ素カリウム水溶液を、ペリスタポンプを用いて、第１ステップで得られた｛｛１｝度の反応系に、流速０．２ｍｌ／ｍｉｎで添加する。

ステップ４：添加後、アンドロステンジオン反応が完了するまで（ＨＰＬＣ追跡）、- 5度から- 10度で反応させ、1gの氷酢酸を加えて過剰の水素化ホウ素カリウムを破壊し、遠心して溶媒を回収し、450mlの蒸留水を加え、10度まで冷却し、濾過し、洗浄し、真空乾燥して粗生成物を得る。

ステップ５：粗生成物を１０倍重量の無水エタノールで溶解し、脱色のために５重量％の活性炭を加え、熱いうちに濾過し、減圧下で８５重量％のエタノールを濃縮し、凍結し、結晶化させ、濾過し、凍結した無水エタノールで洗浄し、８０度で真空乾燥して白色の結晶を得る。品質をテストした結果は次のとおりです。

融点: 153-156 度 (文献値: 152-156 度)。含有量は 98.5% (w/w) (HPLC 法)。質量スペクトル: 289 [M - H]+;核磁気共鳴 1HNMR (CDCl3) 0.79 (s, 3H, CH3), 1.12 (s, 3H.CH3), 3.66 (t, 1H), 5.72 (s, H, CH); IR (KBr、v/cm-1): 352933813027294328732847165616101056。

テスト後の生成物はテストステロンです。副生成物 3,17 ジオールの含有量は 0.45% (w/w) で、テストステロンの収率は 93% (w/w) 以上でした。

レポート II:

ステップ 1: 組換え Y.lipolytica Polh 株の構築

研究室で完全に合成された遺伝子を鋳型として使用し、PCR によって酵素の遺伝子を取得し、クローニング ベクターを接続して多数の遺伝子増幅を実現しました. 17。大幅に増幅されます -。精製後、hsd3 および gdh 遺伝子断片をそれぞれ pINA1292 および pYLSC ベクターに接続しました。検証後、モデル株 Y.lipolytica Polh を形質転換しました。陽性形質転換体を耐性プレート上でスクリーニングし、発酵のために振盪フラスコに接種し、発酵ブロス中の生成物TSをHPLCで検出した。 TSが検出されたことは、ADからTSへの組換え株の構築に成功したことを示している。本発明は最終的に、ADをTSに効率的に形質転換することができるY.lipolytica Polh株を取得する。

ステップ 2: 組換え株の酵素活性の測定

酵素活性測定法：HPLC法を用いた。具体的な方法は次のとおりです。24時間培養した菌液50mLを採取し、4度、8000r/minで5分間遠心分離し、菌を回収し、pH7.0のトリス塩酸緩衝液50mLで2回洗浄し、緩衝液5mlに再懸濁します。氷浴中で. 40%出力の超音波破砕を断続的に2秒と5秒間行い、 10分10000r/minで30分間遠心分離して上清を得た。この上清が標的タンパク質であった。酵素活性の測定方法は以下のとおりです。酵素活性測定系 1mL に 0.5mM NADPH、200μM AD（メタノールに溶解）を加え、適量の酵素溶液を加えます。酵素活性単位の定義：37度μにおける1分間換算 mol AD​​により生成されるTSの量を1酵素活性単位（U）と定義する。グルコースデヒドロゲナーゼ活性の測定方法: 1mL の反応系には 50mM リン酸ナトリウム緩衝液 (pH 6.5)、10mM グルコース、1 μM NADP+. が含まれます。340nm における NADPH 吸光度の変化により活性を測定します。酵素活性単位の定義は次のとおりです。 1/分 μ モル NADPH に必要な酵素の量。酵素活性はそれぞれ7.35U/mgと4.23U/mgに達した。

ステップ 3: 組換え株の全細胞形質転換性能の検出

この菌株を５％接種量のＢＭＧＹ培地１００ｍＬに２４時間接種し、次いで５Ｌ発酵タンクに５％接種量の２Ｌ ＢＭＧＹ培地で４日間接種した。細胞を遠心分離し、2回洗浄し、一定量の50mM Tris HCl pH 7.5緩衝液で再溶解し、変換のために基質ADを追加します。変換条件は次のとおりです:変換温度は37度、変換pHは7.5、基質共溶媒はメチル化- -シクロデキストリン(モル比:1:1)、バイオマス:200g/L、基質濃度：5g/L。全細胞形質転換を3回行った後、15g/Lのアンドロステンジオンは14.3g/Lのテストステロンに変換され、アンドロステンジオンを使用してピキア・パストリスでテストステロンを生産するのは国内外で初めてです。サスタノン補酵素リサイクルシステムを構築し、最終的に変換率を向上させ、テストステロンを効率的に生成するという目標を達成します。

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