サスタノンCAS 58-22-0

サスタノンテストステロン、テストステロン、テストステロンとも呼ばれ、分子式はC19H28O2で、エタノール、エーテル、有機溶媒に溶けるが水には溶けない白い結晶性粉末です。 男性の精巣や女性の卵巣から分泌されるステロイドホルモンの一種です。 副腎も少量のテストステロンを分泌します。 筋肉の強さと質を維持し、骨密度と強度を維持し、リフレッシュして体力を向上させる機能があります。

テストステロンは、もともとマウス精巣セルトリ細胞の濃縮培地から同定された分泌糖タンパク質です。 これは分子量の小さい細胞骨格関連タンパク質であり、受容体関連タンパク質を介して細胞表面にしっかりと結合することができます。

の使用サスタノン:

医療用途: 睾丸炎、男性更年期症候群、インポテンス、その他の疾患の代替治療に使用されます。

スポーツでの使用: 筋肉の数を増やします。 筋肉量を増やすために運動する一部の人々は、治療用量の 250 倍の用量を使用します。

その他の用途: 生化学研究; 男性の性器および男性の同性愛者の兆候の発達と成長を制御する天然のアンドロゲン。

リスク：にきび、浮腫。

テストステロン合成サスタノン:

報告Ⅰ

ステップ1: アンドロステンジオン30gを10倍重量の混合溶媒(ジクロロメタン:テトラヒドロフラン=1∶1)に溶かし、- 15度まで冷却する。

ステップ 2: 3g の水素化ホウ素カリウムを 30ml の蒸留水または純水に溶かします。

工程３：第２工程で得られた水素化ホウ素カリウム水溶液を、第１工程で得られた反応系にペリスタルティックポンプを用いて- 8度で添加し、流速は0.2ml/minである。 .

ステップ 4: 添加後、アンドロステンジオン反応が完了するまで - 5 度から - 10 度で反応させ (HPLC 追跡)、氷酢酸 1g を加えて過剰の水素化ホウ素カリウムを破壊し、スピンして溶媒を回収し、 450mlの蒸留水、10度まで冷却、濾過、洗浄、真空乾燥して粗生成物を得る。

ステップ 5: 粗生成物を重量の 10 倍の無水エタノールで溶解し、脱色のために 5wt% の活性炭を加え、熱いうちにろ過し、減圧下で 85wt% のエタノールを濃縮し、凍結し、結晶化し、ろ過し、凍結した無水エタノールで洗浄し、真空にします。 80度で乾燥させて白い結晶を得る。 品質がテストされ、結果は次のとおりです。

融点：{{0}}度（文献値：152-156度）; 含有量は 98.5% (w/w) (HPLC 法)。 質量スペクトル: 289 [M - H] プラス; 核磁気共鳴 1HNMR (CDCl3) 0.79 (s, 3H, CH3), 1.12 (s, 3H.CH3), 3.66 (t, 1H), 5.72 (s, H, CH); IR (KBr、v/cm-1): 352933813027294328732847165616101056。

テスト後の製品はテストステロンです。 副産物の 3,17 ジオール含有量は 0.45% (w/w) で、テストステロンの収率は 93% (w/w) を超えていました。

レポート II:

ステップ 1: 組換え Y.lipolytica Polh 株の構築

実験室で完全に合成された遺伝子を鋳型として、酵素の遺伝子をPCRで取得し、クローニングベクターを接続することで多数の遺伝子増幅を実現しました。 大幅に増幅される17 - 精製後、hsd3およびgdh遺伝子断片をそれぞれpINA1292およびpYLSCベクターに接続した。 検証後、モデル株 Y.lipolytica Polh を形質転換しました。 陽性形質転換体を耐性プレート上でスクリーニングし、発酵のために振とうフラスコに接種し、発酵ブロス中の生成物ＴＳをＨＰＬＣによって検出した。 TSが検出され、ADからTSへの組換え株の構築に成功したことが示された。 本発明は最終的に、ＡＤをＴＳに効率的に形質転換することができるＹ．

ステップ 2: 組換え株の酵素活性の測定

酵素活性測定法：HPLC法を用いた。 具体的な方法は次のとおりです: 24 時間培養した菌液 50 mL を取り、4 度、80 00r/min で 5 分間遠心分離し、菌を集め、50 mL の Tris HCl で 2 回洗浄します。 pH 7.0 の緩衝液を加え、5ml の緩衝液で再懸濁します。 氷浴で 40% の出力の超音波破砕、断続的に 2 秒と 5 秒、10 分間作業。 １００００ｒ／ｍｉｎで３０分間遠心分離して得た上清を目的タンパク質とした。 酵素活性の測定方法は次のとおりです。酵素活性測定システム 1 mL には 0.5 mM NADPH、200 μ M AD (メタノールに溶解) が含まれ、次に適量の酵素溶液を加えます。 酵素活性単位の定義：37度μで1分換算 mol AD​​で生成されるTS量を1酵素活性単位（U）と定義する。 グルコースデヒドロゲナーゼ活性の測定方法: 1 mL 反応系には、50 mM リン酸ナトリウム緩衝液 (pH 6.5)、10 mM グルコース、および 1 μ M NADP plus が含まれます。 340nmにおけるNADPHの吸光度の変化から活性を判定します。 酵素活性単位の定義は次のとおりです。1 分あたり 1 μ mol NADPH に必要な酵素の量。 酵素活性はそれぞれ7.35U/mgと4.23U/mgに達した。

ステップ 3: 組換え株の全細胞形質転換性能の検出

菌株を、接種量５パーセントのＢＭＧＹ培地１００ｍＬに２４時間接種し、次いで、接種量５パーセントのＢＭＧＹ培地２Ｌを含む５Ｌの発酵タンクに４日間接種した。 細胞を遠心分離し、２回洗浄し、一定量の５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ ｐＨ７．５緩衝液で再溶解し、変換用基質ＡＤを加え、変換条件は、変換温度３７℃、変換ｐＨ７．５、基質共溶媒はメチル化- -シクロデキストリン (モル比: 1:1)、バイオマス: 200g/L、基質濃度: 5g/L。 全細胞形質転換を3回行った後、15g/Lのアンドロステンジオンは14.3g/Lのテストステロンに変換され、アンドロステンジオンを使用してPichia pastorisでテストステロンを生産するのは国内外で初めてです。サスタノン補酵素のリサイクルシステムを開発し、最終的に変換速度を向上させ、テストステロンを効率的に生産するという目標を達成します。

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