ACE 031 ペプチド

固相合成では、欠落ペプチドや挿入ペプチドなどの不純物が発生しやすくなります。{0}たとえば、Gln-Asn 結合を合成する場合、アスパラギンの転座を避けるために反応 pH (7.5-8.0) を制御する必要があります。カップリング剤を最適化することにより (HBTU の代わりに COMU を使用するなど)、副生成物の割合を大幅に減らすことができます。

ACE-031 は 24- ペプチドであり、合成プロセス中に副生成物が蓄積するリスクが比較的高くなります。- 「フラグメント縮合法」（つまり、最初に5-10個のペプチドフラグメントを合成し、次にそれらを液相法で接続する-）は、総収量を増加させることができます。たとえば、ACE-031 は、Ala-Trp-Arg (フラグメント 1)、Gln-Asn-Thr-Arg (フラグメント 2) などに分割され、各フラグメントはスプライシング前に個別に合成されます。

品質管理基準: 最終製品は次の指標を満たしている必要があります。

 純度: HPLC で検出されるメイン ピーク面積パーセンテージは 98% 以上、単一不純物は 0.5% 以下です。

 内容: アミノ酸組成分析の誤差は±15%以下。

 溶解度: 水または DMSO に容易に溶解し、沈殿することなく 10 mg/mL 以上の濃度で溶解します。

 安定性: ACE-031 は、-20 度で 3 年間保存しても純度は 2% 以上低下しません。

最初に滅菌水または PBS (pH 7.4) を使用してみてください。溶解度が不十分な場合は、ポリペプチドの性質に応じて調整してください。 ACE-031 に塩基性アミノ酸 (Arg、Lys など) が含まれている場合は、10% ～ 30% の酢酸を試してください。酸性アミノ酸（Asp、Glu など）が含まれる場合は、13% アンモニア水を使用してください。たとえば、ある研究では、細胞毒性を避けるために、ACE-031 を DMSO に溶解し、その後 PBS で目標濃度まで希釈して、最終 DMSO 濃度が 1% 未満になるようにしました。

溶解する前に、吸湿を避けるためにポリペプチドを室温に戻してください。暴露時間を短縮するために、ボトルのキャップを開けた後すぐに計量します。溶解を促進するために超音波または加熱 (50 度以下) を使用しますが、変性を引き起こす高温は避けてください。溶解後は凍結融解を繰り返さないように小分けして保存してください。

ラットの後頭蓋窩筋への筋肉内注射を例にとると、ACE-031 は 5 mg/kg 体重の濃度で調製されました。ラットの平均体重が 20 g、投与量が 100 μL の場合、1 匹のラットの投与量は=5 mg/kg × 0.02 kg=0.1 mg、使用溶液濃度は=0.1 mg/0.1 mL=1 mg/mL となります。実験では通常、損失を補うためにさらに 1 ～ 2 倍の量の動物を準備する必要があります。

C2C12 筋管分化モデルでは、ACE-031 の濃度範囲は 10 ～ 100 nM です。たとえば、10 nM の作業溶液を調製する場合: 1 mg の ACE-031 (分子量 2956.49) を 1 mL の DMSO に溶解して 1 mM ストック溶液を取得し、次にそれを培地で 100,000 倍に希釈して 10 nM にします。