レタルトルチド(リンク:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html）は化学合成された長時間作用型 GLP-1R/GIPR/GCGR ポリペプチド アゴニストで、成人 2 型糖尿病、体重管理、非アルコール性脂肪肝/非アルコール性脂肪性肝炎の治療を目的としています。 本品は、2023年8月29日に成人2型糖尿病を効能・効果として臨床使用が承認されました。また、非アルコール性脂肪肝・非アルコール性脂肪肝炎を効能・効果として臨床登録申請中、最終審査段階にあります。 世界で開発中の GLP{6}R/GIPR/GCGR アゴニストは 8 種類ありますが、その中でリタのレタトルチドが最も急速に進歩し、今年 6 月に第 3 相臨床試験を開始しました。 同月、リタ社は、ADA年次総会でレタルトルチドの第2相研究データが発表され、24週間でレタルトルチド（1mg、4mg、8mg、または12mg）が有効性の主要評価項目に達したことを示したと発表した。糖尿病のない肥満または過体重の参加者を対象とした評価で、平均体重減少は 17.5% でした。 二次評価項目のうち、48 週間の治療終了時点で平均 24.2% の体重減少が達成されました。 また、公開された方法に基づいて研究室でペプチドを合成しました。 具体的な合成方法を簡単に説明しますので、具体的な手順をメールでお送りください。
方法 1:
実験室で固相合成を使用してレタルチドを合成する詳細な手順は次のとおりです。
必要な試薬と機器を準備します: アミノ酸、ジクロロメタン、炭酸カリウム、エトキシル化シリカゲル、アセトニトリル、ピリジン、N-メチルモルホリン、ジイソプロピルエチルクロリド源、トリフルオロ酢酸、DIPEA、Boc 保護アミノ酸およびその他の試薬、マグネティックスターラーなど、ロータリーエバポレーターおよびその他の機器。
(1) Boc 保護アミノ酸の合成: 必要なアミノ酸をジクロロメタンに溶解し、炭酸カリウム粉末を加え、均一に撹拌し、エトキシル化シリカゲルを加え、撹拌を続けた後、ピリジンおよび N-メチルモルホリンを加えて Boc 保護アミノ酸を取得します。
（２）固相合成：アセトニトリル、ジイソプロピルエチルクロリド源、トリフルオロ酢酸を混合し、均一に撹拌し、調製したＢｏｃ保護アミノ酸を加え、撹拌を続けて固相合成生成物を得る。
(3) 脱保護基: 固相合成物をジクロロメタンに溶解し、トリフルオロ酢酸を加え、均一に撹拌した後、DIPEA を加えます。 撹拌を続けて、脱保護された固相合成物を得る。
(4) 精製: 脱保護固相合成物を水に溶解し、水酸化ナトリウム溶液で pH を約 9.0 に調整し、次に酢酸で pH を約 5.0 に調整し、最後に純粋な生成物をエーテルで沈殿させます。
方法 2:
研究室で液相合成を使用してレタルチドを合成する詳細な手順は次のとおりです。
必要な試薬と器具を準備します: アルギニン、グリシン、無水酢酸、トリエチルアミン、炭酸カリウム、ジクロロメタン、メタノール、ピリジン、N-メチルモルホリン、無水酢酸、酢酸ナトリウム、その他の試薬、およびスターラー、分液漏斗などの器具。真空ポンプ、オーブン、クロマトグラフィー カラムなど。
(1) アルギニンとグリシンを適量のジクロロメタンに溶解し、適量の無水酢酸とトリエチルアミンを加え、スターラーで均一に撹拌します。
（２）溶解した混合物をオーブンに移し、８０℃で１時間加熱してアミノ酸残基をアセチル化する。
（３）反応溶液を炭酸カリウム粉末で中和し、溶液中の酢酸を中和して酢酸ナトリウムを生成し、生成したペプチドをジクロロメタンで抽出する。
（４）抽出したペプチド溶液をメタノールで洗浄し、真空ポンプでろ過して粗ペプチドを得る。
(5) 粗ペプチドを適量のピリジンおよびN-メチルモルホリンに溶解し、適量の無水酢酸および酢酸ナトリウムを加え、スターラーで均一に撹拌する。
（５）反応溶液を真空ポンプで濾過し、濾過ケーキをメタノールで洗浄した後、真空ポンプで濾過して、最終的なレスタルチドを得る。
方法 3:
研究室で化学的方法を使用してレタルチドを合成する詳細な手順は次のとおりです。
必要な試薬と器具を準備します: アルギニン、グリシン、無水酢酸、トリエチルアミン、炭酸カリウム、ジクロロメタン、メタノール、ピリジン、N-メチルモルホリン、無水酢酸、酢酸ナトリウム、その他の試薬、およびスターラー、分液漏斗などの器具。真空ポンプ、オーブン、クロマトグラフィー カラムなど。
(1) アルギニンとグリシンを適量のジクロロメタンに溶解し、適量の無水酢酸とトリエチルアミンを加え、スターラーで均一に撹拌します。
（２）溶解した混合物をオーブンに移し、８０℃で１時間加熱してアミノ酸残基をアセチル化する。
（３）反応溶液を炭酸カリウム粉末で中和し、溶液中の酢酸を中和して酢酸ナトリウムを生成し、生成したペプチドをジクロロメタンで抽出する。
（４）抽出したペプチド溶液をメタノールで洗浄し、真空ポンプでろ過して粗ペプチドを得る。
(5) 粗ペプチドを適量のピリジンおよびN-メチルモルホリンに溶解し、適量の無水酢酸および酢酸ナトリウムを加え、スターラーで均一に撹拌する。
（６）反応溶液を真空ポンプで濾過し、濾過ケーキをメタノールで洗浄し、その後、真空ポンプで濾過して、最終的なレスタルチドを得る。
目的の分子を得るには複数の有機合成反応が必要です。 さらに、この方法では複数の有機試薬と複雑な操作条件が使用されるため、研究室でのロタルチドの化学合成は通常、大規模生産や工業用途には適していません。 大規模生産や工業用途の場合、より一般的に使用される方法は、生合成や液相合成などの合成方法を通じてロタルチドを調製することです。これらの方法は、実験室規模では比較的小規模で、操作が比較的簡単で、少量の製品の調製に適しています。 。 これらの方法によって得られるレタルチドは、化学的方法によって合成されたレタルチドと構造および生物学的活性が類似または類似しているが、収率が高く、調製が容易であるという利点を有する。 同時に、それらはより優れた工業化の可能性とより広範な応用の見通しも持っています。
方法 4:
研究室で生物学的手法を使用してレタルチドを合成する詳細な手順は次のとおりです。
必要な遺伝子と試薬の準備：遺伝子ライブラリーからレタトルチド遺伝子を含むプラスミドを取得し、そのプラスミドを受容細胞（大腸菌など）で形質転換し、レタトルチド遺伝子を含む遺伝子操作細菌を取得します。
(1) エンジニアリングバクテリアの培養：適切な温度、pH、イオン濃度の条件下で培地を用いてエンジニアリングバクテリアを培養し、大量に増殖させます。
（２）レタルチドの抽出：培養したエンジニアリング細菌を破砕機で破砕し、限外濾過、沈降等の方法によりレタルチドから菌体断片を分離し、粗生成物を得る。
（３）レタルチドの精製：粗製レタルチドをクロマトグラフィー技術を用いて精製し、高純度のレタルチドを得る。
ロタルチドの検出と同定: 高速液体クロマトグラフィー、質量分析法、核磁気共鳴、およびその他の技術を使用して、精製ロタルチドの構造を検出および同定します。
実験室におけるレタルチドの生物学的合成の化学反応方程式には、主に、転写と翻訳の 2 つのステップを含む遺伝子発現プロセス中の化学反応が含まれます。
転写: DNA の二本鎖が開き、一方の鎖を鋳型として使用して RNA 鎖を合成しますが、これには RNA ポリメラーゼの関与が必要です。 反応式は次のとおりです。
DNA二本鎖: DNApol → mRNA+DNApol
翻訳: リボソームは mRNA に結合してペプチド鎖を合成しますが、このプロセスにはアミノ酸とエネルギーの関与が必要です。 反応式は次のとおりです。
リボソーム+mRNA → ペプチド鎖+GDP+Pi+H2O
ペプチド鎖+ATP → ペプチド鎖+AMP+PPi
このうち、DNApol は DNA ポリメラーゼを表します。 mRNAはメッセンジャーRNAを表します。 リボソームはリボソームを表します。 ペプチド鎖はポリペプチド鎖を表します。 GDP はグアノシン二リン酸を表します。 Piは無機リン酸を表す。 H2O は水を表します。 ATPはアデノシン三リン酸を表します。 AMPはアデノシン一リン酸を表します。 ＰＰｉは無機ピロリン酸塩を表す。 これらの反応により、レタルチドの合成に必要なペプチド鎖が生成され、後の段階で処理および修飾されてレタルチドが得られます。
上記は研究室でロタルチドを合成する一般的な方法であり、それぞれに異なる利点、欠点、および使用範囲があります。 研究室では通常、研究および実験用途の小規模生産には液相合成法と固相合成法が使用されます。 一方、工業生産では、市場の需要を満たすために生合成と液相/固相生産を組み合わせた大規模生産が採用されています。 これらの方法では、最終製品の品質と純度を確保するために厳密な条件の最適化とプロセス制御が必要であることに注意してください。