Sephadex G75優れた性能を備えた一種のゲルフィルターフィラーです。デキストランとエピクロロヒドリンを架橋することで調製されます。これは、大量のヒドロキシル基を備えたビーズ型のゲルであり、水と電解質溶液で簡単に膨らむことができます。この化合物の最大除外制限は80000であり、特定の膨潤度は乾燥樹脂の量と動作条件に依存します。たとえば、特定の条件下では、乾燥樹脂の膨張度は519ml/gである場合があります。動作pH範囲が6.210（一部の製品の場合は5.210）の場合、化合物は安定したままです。パフォーマンスと安定性を維持するために、室温で涼しい、涼しく、光から離れることをお勧めします。この物質は、80000を超える分子量の大きな生体分子に特に適しています。主にこのような大きな生体分子の淡水化と緩衝液置換に使用されます。 1つの-ステップ操作により、迅速に脱塩化し、汚染物質を除去し、分子を新しいバッファーソリューションに移すことができます。淡水化と緩衝液の置換に加えて、Sephadex G-75は、大きな生体分子の精製プロセスにも適しています。
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Sephadex G75は、主に生化学と分子生物学の分離および精製技術に使用されるデキストランゲルです。この物質の主な用途は次のとおりです。
淡水化プロセスでは、生物学的分子溶液から塩（通常は小分子無機塩）を効果的に除去できます。この物質の利点は、操作が容易で、速く、生体分子の活性を変えることなく効果的な脱塩を達成できることです。さらに、その優れた化学的安定性と生体適合性により、タンパク質、ペプチド、核酸などのさまざまな生体分子の脱塩処理に適しています。実際の用途では、通常、イオン交換、アフィニティクロマトグラフィーなどの他の精製技術と組み合わせて、生物溶布の生物溶布と分離を実現します。
この物質には、特に生化学と分子生物学の分野で、緩衝液置換の幅広い用途があります。たとえば、タンパク質精製のプロセスでは、あるバッファーシステムからその安定性と活動により適した別のバッファシステムにタンパク質を伝達する必要がある場合があります。そして、この物質はこの目標を効果的に達成できます。核酸抽出の過程で、核酸を不純物と塩を含む溶液から分離し、それを後続の操作のために新しい緩衝液に移す必要があります。また、このシナリオにも適用されます。細胞培養中は、細胞の成長と活性を維持するために培養媒体またはバッファーを交換する必要がある場合があります。古い培地やバッファーから有害物質を除去し、新しい培地またはバッファーを導入するために使用できます。
分子ふるい
タンパク質の研究と調製プロセスでは、通常、標的タンパク質を複雑な混合物から分離する必要があります。サイズに基づいてタンパク質を分離し、それによりタンパク質精製を達成できます。溶出感のイオン強度やpH値などの溶出条件を調整することにより、タンパク質の分離効率をさらに最適化できます。タンパク質と核酸に加えて、多糖類、酵素、抗体などの他の生体分子の分離と精製にも使用できます。この物質は分子量測定のツールとして直接使用されていませんが、分子量測定の補助ツールとして機能します。
タンパク質精製の過程で、通常、タンパク質溶液から塩、小分子代謝産物、非結合リガンドなどの小分子不純物を除去する必要があります。この物質は、これらの小分子不純物をタンパク質溶液から効果的に除去し、それによってタンパク質の純度を改善することができます。その分子ふるい効果により、これらの小分子不純物を効果的に除去し、より純粋な核酸をもたらします。酵素製剤には通常、未反応の基質、阻害剤、代謝物などの小分子不純物が含まれています。これらの不純物は、酵素の活性と安定性に影響を与える可能性があります。材料のゲルろ過により、これらの小分子不純物を効果的に除去し、酵素調製の純度を改善することができます。タンパク質と核酸に加えて、
細胞間信号変換をシミュレートします
細胞間信号伝達は、細胞認識、信号変換、生理学的反応などの複雑なプロセスを含む、生命活動の中心的な調節メカニズムです。従来の研究はしばしばライブセルモデルに依存していますが、複雑な信号ネットワークや複数の干渉要因などの制限があります。Sephadex G75古典的なデキストランゲルろ過培地です。その多孔質構造と分子ふるい効果は、細胞間信号変換をシミュレートするためのユニークな物理モデルを提供します。
Sephadex G-75を使用した細胞間信号変換をシミュレートするための物理モデル
細胞間ギャップジャンクションのシミュレーション
ギャップジャンクションは、隣接する細胞間でリンカーを介して形成される親水性チャネルであり、分子量の小分子を自由に交換できるようになります<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
シグナル分子の勾配形成：異なる濃度のシグナル分子（cAMP、ca²+など）がゲルカラムにロードされます。ゲル細胞における小分子の拡散速度の違いは、分子ふるい効果によって観察でき、細胞間の化学シグナルの勾配伝達をシミュレートできます。
相乗的応答シミュレーション：2つの相互作用する分子（リガンドや受容体など）がそれぞれゲルカラムの両端にロードされ、それらの結合動力学は、細胞間の直接接触通信における分子認識プロセスをシミュレートするために溶出時差を介して分析されます。
膜表面での分子接触のシミュレーション
膜表面分子間の通信は、細胞膜表面タンパク質の特定の相互作用に依存しています。 Sephadex G-75は、機能的な変更を通じてこのプロセスをシミュレートできます。
受容体リガンド結合実験：ビオチン化受容体タンパク質（EGFRなど）はゲル粒子の表面に固定され、蛍光標識リガンド（EGFなど）がストレプトアビジンビオチン系を介して捕捉され、結合信号強度は蛍光デコンで監視され、受容体リガンドアフィニティを定量化します。
競合結合分析：ゲルカラムの受容体リガンド複合体をプリロードし、異なる濃度（抗EGFR抗体など）の競合阻害剤を追加し、溶出ピークシフトを介して阻害定数（KI）を計算し、細胞シグナル経路に対する薬物の介入効果をシミュレートします。
化学信号伝達のシミュレーション
化学シグナル伝達は、体液または細胞外マトリックスを介して細胞を介して細胞を標的とする化学シグナル伝達分子（ホルモンやサイトカインなど）の拡散に依存しています。 sephadex g - 75は、3次元拡散モデルを構築できます。
パラクリン系シミュレーション：分泌細胞（マクロファージなど）および標的細胞（T細胞など）はそれぞれゲルミクロスフェアにカプセル化されており、標的細胞（CD69発現など）の活性化状態がCO培養を通じて観察され、パラクリン信号の局所効果をシミュレートします。
内分泌シグナル伝達：蛍光標識ホルモン（インスリンなど）はゲルカラムにロードされ、ゲル細孔との相互作用は溶出時間を通じて分析され、血液循環および標的臓器分布におけるホルモンの半分-寿命は、数学モデルを組み合わせることによって予測されます。
細胞シグナル伝達研究におけるセファデックスG-75のアプリケーションケース
赤血球シグナル伝達とインテグリン機能に関する研究
血小板接着受容体インテグリンIIB 3は、血小板膜の表面で最も豊富な糖タンパク質であり、止血と血栓形成に重要です。 Sephadex G-75の使用を研究して、血小板と内皮下コラーゲン間の相互作用をシミュレートします。
インテグリン活性化モデル：精製されたインテグリンIIB 3をゲル粒子の表面に固定し、可溶性フィブリノーゲン（FG）をリガンドとして添加しました。結合動態は、表面プラズモン共鳴（SPR）によって検出されました。活性化後のインテグリンのFGへの親和性が大幅に改善されたことがわかった（kdはμmからnmに減少した）。
抗血小板薬スクリーニング：ゲルカラムのプリロードインテグリンFG複合体、異なる濃度（ティロフィバンなど）の抗血小板薬を追加し、溶出ピーク変位によるインテグリン活性上の薬物の阻害速度を計算し、新しい抗ウンボ酸薬の発達のための高-スループットスクリーニングプラットフォームを提供します。
腫瘍関連シグナル伝達経路の調節
腫瘍細胞は、MAPKやPI3K/Aktなどのシグナル伝達経路の異常な活性化により、増殖と転移を促進します。 Sephadex G-75は、シグナル伝達経路で重要なタンパク質を分離および精製するために使用できます。
EGFRシグナル経路の研究：EGFRタンパク質は、Sephadex G-75ゲルろ過によって精製され、そのリン酸化状態は質量分析によって分析されました。 EGFのY1068およびY1086部位のリン酸化レベルは、EGF刺激後に大幅に増加し、下流のERK1/2およびAKTシグナルを活性化したことがわかりました。
薬剤耐性メカニズム分析：薬物-耐性胃癌細胞（SGC7901/VCR）で、UHRF1タンパク質はSephadex G-75によって分離および精製され、その過剰発現はアポトーシス関連のタンパク質の活性化を阻害する可能性があることがわかりました。
免疫細胞シグナル伝達と多糖類の調節
赤藻類多糖（BFP）は、マクロファージのNF {-κBおよびMAPKシグナル伝達経路を活性化することにより、免疫応答を促進します。 Sephadex G-75を使用したBFPとその成分（F1、F2、F3）の分離と精製に関する研究：
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95％は、DEAEセルロース52イオン交換クロマトグラフィーと組み合わせたセファデックスG-75ゲルろ過によって得られ、その分子量はそれぞれ120 kDa、85 kDa、60 kDa、45 kDaでした。
シグナル経路の活性化：RAW264.7マクロファージモデルでは、BFPとその成分はNOとTNFの分泌を大幅に誘導できます。 Sephadex g - 75で分離された精製成分は、F1がNF -κBおよびMAPK経路に対して最も強い活性化効果があることを示しました（NO生産量を2.5倍、TNF分泌を3回増加させます）。
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